PCR熒光試劑盒用于檢測動物綠膿桿菌核酸。綠膿桿菌是SPF實驗大、小鼠必須檢測并排除的病原菌之一,因此快速、準確做好實驗動物綠膿桿菌檢測十分重要。基于SYBR Green I染料法的基本原理,綠膿桿菌特異性引物與變性的DNA分子通過PCR反應生成雙鏈DNA,SYBR Green I與雙鏈DNA結合發出熒光,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步,通過熒光信號,對PCR進程進行實時監測。
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。或者使用熒光染料SYBR。SYBR可以結合到雙鏈DNA上面,當體系中的模板被擴增時,SYBR可以有效結合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進行,結合的SYBR染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強,從而達到定量的目的。
一般說來,應選用口碑較好的經過大量客戶實驗驗證的PCR熒光試劑盒,因為只有選對了試劑盒才能夠做成漂亮的實驗結果來,特別是對于一些珍貴的樣品更不能因為節約一些蠅頭小利而破壞了樣品本身。PCR熒光試劑盒在研發之初就考慮到了一般科研環境中方方面面的影響,例如我們就光照強度、光照時間對本產品的影響做了嚴苛的實驗論證,得到1ml本產品盛裝于1.5ml離心管中放置在光照強度下可以保存12h,超過12h產品性能則會下降。